鼠尾膠原蛋白是從大鼠尾腱中提取的高純度天然膠原，因其結構完整、生物相容性優異，被廣泛應用于3D細胞培養、組織工程支架、傷口修復模型及藥物遞送系統等前沿研究。其制備過程對溫度、pH、離子強度及操作潔凈度敏感，稍有偏差即導致變性、降解或凝膠性能異常。掌握
鼠尾膠原蛋白標準化、無菌化的制備方法，是保障實驗可重復性與生物學功能的關鍵。
一、材料與前期準備
實驗動物：選用健康成年SD或Wistar大鼠（6–12周齡），尾部無損傷；
試劑：0.1%醋酸溶液（用超純水配制，4℃預冷）、PBS緩沖液、75%乙醇；
器具：無菌手術剪/鑷、玻璃勻漿器、離心管、磁力攪拌器、低溫離心機（4℃）、0.22μm濾器；
環境：全程在超凈工作臺內操作，所有器具經高溫高壓滅菌。
二、尾腱分離與清洗
處死大鼠后迅速取下整條尾巴，浸入75%乙醇消毒30秒；
在冰上剝離皮膚，逐節剪斷尾椎骨，小心分離白色尾腱束；
將尾腱置于預冷PBS中反復漂洗，去除血跡與脂肪組織。
三、酸溶提取（關鍵步驟）
將洗凈的尾腱剪碎（約1–2mm段），按1g組織:50mL比例加入0.1%冰醋酸溶液；
4℃磁力攪拌24–48小時（避光），使膠原充分溶出；
注意：全程保持低溫，防止酶解或熱變性；避免劇烈震蕩產生氣泡導致蛋白氧化。
四、離心與過濾純化
4℃下以10,000–12,000×g離心30分鐘，棄沉淀；
上清液經0.22μm濾膜過濾除菌，得澄清淡黃色膠原溶液；
可分裝于無菌EP管，–20℃或–80℃保存（避免反復凍融）。
五、濃度測定與質量驗證
羥脯氨酸法或BCA法測定蛋白濃度（通常為1–3mg/mL）；
SDS-PAGE電泳驗證α1、α2鏈完整性（典型條帶約130kDa和120kDa）；
凝膠形成測試：將膠原液調至中性（加10×PBS和NaOH），37℃孵育30分鐘，應形成均勻凝膠。
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更新時間：2025-12-02
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